Перевод энергии флуоресцентного резонанса (FRET)
Перенос энергии резонанса флуоресценции (FRET)-это процесс нерадиативного переноса энергии, в котором энергия возбужденного донора передается в акцепторное возбужденное состояние посредством взаимодействия межмолекулярных электрических пар. Этот процесс не включает фотоны и поэтому является нерадиативным. Этот анализ имеет преимущества быстрого, чувствительного и простого.
Краситель, используемый в анализе FRET, может быть идентичным. Но в большинстве приложений на самом деле используются разные красители. Короче говоря, передача энергии светящейся резонанса представляет собой перенос пары диполей от донора (краситель 1) акцептору (Dye 2), когда донорская группа возбуждена. В целом, спектр излучения донорской группы флуорофоров перекрывается со спектром поглощения акцепторной группы. «Когда уместно расстояние между двумя флуорофорами (10 - 100 a), можно наблюдать перенос энергии флуорофора от донора на акцептор». Метод переноса энергии зависит от химической структуры рецептора:
1. Преобразуется в молекулярную вибрацию, то есть светящийся свет переноса энергии исчезает. (Рецептор является световым гасителем)
2. Эмиссия более интенсивна, чем сам рецептор, что приводит к красному смещению во вторичной флуоресцентной спектре ». (Рецепторы - светящиеся излучатели).
Донорская группа (EDANS) и акцепторный ген (dabcyl) равномерно связаны с естественным субстратом ВИЧ -протеазы, и когда субстрат не отключен, Dabcyl может Quenle Edans, а затем становятся незамеченными для фторина. После отключения протеазы ВИЧ-1 Эданс больше не гасит Dabcyl, и впоследствии могут быть обнаружены эданские люциферазы. Доступность ингибиторов протеазы может контролироваться изменениями интенсивности флуоресценции эданов.
Пептиды FRET являются удобными инструментами для изучения неспецифичности пептидазы. Поскольку его процесс реакции может быть непрерывно контролироваться, он обеспечивает удобный метод обнаружения активности фермента. Шин, продуцированный после гидролиза пептидных связей донором/акцептором, обеспечивает меру ферментной активности при наномолярных концентрациях. Когда пептид FRET не поврежден, он показывает внезапное исчезновение внутренней вспышки, но когда любая пептидная связь напротив донора/акцептора разрывается, она выделяет вспышку, которая может быть обнаружена непрерывно, а активность фермента может быть затем количественно определено.
Время публикации: 2025-07-02