Рэкамбінантныя бялковыя антыгены часта маюць некалькі розных эпітопаў, некаторыя з якіх з'яўляюцца эпітопамі паслядоўнасці, а некаторыя - структурнымі эпітопамі.Поліклональныя антыцелы, атрыманыя шляхам імунізацыі жывёл дэнатураваным антыгенам, уяўляюць сабой сумесі антыцелаў, спецыфічных да асобных эпітопаў, і могуць выкарыстоўвацца ў цэлым для выяўлення прыродных структур або дэнатураваных бялкоў-мішэняў.Пабочным перавагай выкарыстання дэнатураваных бялкоў у якасці імунагенаў з'яўляецца тое, што дэнатураваныя вавёркі, як правіла, больш імунагенныя і могуць стымуляваць моцны імунны адказ у жывёл.
Сістэма экспрэсіі кішачнай палачкі звычайна выбіраецца для антыгенных мэтаў, таму што гэта самая дарагая сістэма з пункту гледжання часу і грошай.Для паляпшэння магчымасці экспрэсіі мэтавага бялку і зручнасці ачысткі часам экспрэсуюць толькі невялікі фрагмент мэтавага бялку, напрыклад, спецыфічны дамен.
Трохмерная структура бялкоў
Спецыфічны дамен бялку
Калі мэтай падрыхтоўкі антыцелаў з'яўляецца выключна выяўленне бактэрый, эканамічна і хутка выкарыстоўваць сінтэтычны малы пептыд у якасці антыгена, але існуе рызыка слабой імунагеннасці або нерэгеннасці з-за няправільнага выбару пептыднага сегмента.Паколькі падрыхтоўка антыцелаў патрабуе працяглага перыяду, часта выбіраюць два ці тры розных пептыдных сегмента для падрыхтоўкі антыцелаў з выкарыстаннем поліпептыднага антыгена, каб забяспечыць паспяховасць эксперыменту.
Чысціня полипептидного антыгена для імунізацыі павінна быць больш за 80%.Хаця больш высокая чысціня можа тэарэтычна атрымаць антыцелы з лепшай спецыфічнасцю, на практыцы жывёлы заўсёды выпрацоўваюць вялікую колькасць неспецыфічных антыцелаў, такім чынам маскіруючы перавагі чысціні антыгена.
Акрамя таго, прэпарат антыцелаў з малых пептыдаў павінен быць сшыты з адпаведным антыгенам-носьбітам для павышэння яго імунагеннасці.Двума распаўсюджанымі носьбітамі антыгенаў з'яўляюцца KLH і BSA.
Час публікацыі: 23 сакавіка 2023 г