Фон
Меланотан I, также известный как афамеланотид, представляет собой линейный полипептид, состоящий из 13 аминокислот, который будет играть все более важную роль в фармацевтических исследованиях. Основные английские названия Меланотана I — Меланотан-1 и Афамеланотид. Как синтетический аналог α-меланоцитстимулирующего гормона α-MSH) Меланотан I может применяться для лечения нарушений фоточувствительности, вызванных эритропоэтической протопорфирией. В настоящее время большинство продуктов Melanotan I предназначены только для исследовательского использования и еще не предназначены для применения человеком. При традиционном твердофазном синтезе выбор смолы существенно влияет на эффективность сочетания и конечную чистоту продукта.
Основная информация
Китайское название: Меланотан 1
Английское название: Меланотан-1
Номер компании: GT-A006
Номер CAS: 75921-69-6
Последовательность: SYS{Ne}EH{D-Phe}RWGKPV-NH2
Молекулярная формула: C78H111N21O19.
Молекулярный вес: 1646,88
Способ приготовления
Я. Приготовление смолы Fmoc-вал-амино
Шаг 1:Взвесьте 11,11 г (5 ммоль) смолы Ramage Amide AM со степенью замещения 0,45 ммоль/г и добавьте ее в твердофазный реактор. Добавьте DCM, чтобы смола набухла в течение 30 минут, затем слейте воду. Промыть три раза ДМФ. Добавьте раствор ДМФ, содержащий 20% пиперидина (об./об.), и реагируйте в течение 5 минут. Добавьте еще 20% раствор пиперидина в ДМФ и действуйте в течение 10 минут с одной промывкой ДМФ между ними. После завершения реакции слейте воду и трижды промойте ДМФ.
Шаг 2:Растворите 5,09 г Fmoc-Val-OH, 2,02 г HOBT (1-гидроксибензотриазол) и 2,32 мл DIC (N,N'-диизопропилкарбодиимид) в ДМФ при 0°C. После полного растворения добавляют смесь в реакционную колонку и проводят реакцию при комнатной температуре в течение 1 часа. За ходом реакции следят с помощью нингидриновой пробы, гарантируя отрицательный результат. После завершения реакции трижды промывают ДМФ для получения Fmoc-валамино смолы.
II. Получение полностью защищенного смоляного пептида меланотана I.
Шаг 1:Добавьте 20% пиперидина в растворе ДМФ (объемное соотношение) к указанному выше Fmoc-Val-аминорезину. Реагируют 5 минут, затем добавляют еще порцию 20%-ного раствора пиперидина в ДМФ и реагируют 10 минут. Промойте один раз ДМФ во время перерыва. После завершения реакции высушить в вакууме и трижды промыть ДМФ.
Шаг 2:Растворите 5,06 г Fmoc-Pro-OH, 2,02 г HOBT (1-гидроксибензотриазол) и 2,32 мл DIC (N,N'-диизопропилкарбодиимид) в ДМФ при 0°C. После полного растворения добавляют смесь в реакционную колонку и проводят реакцию при комнатной температуре в течение 1 часа. За ходом реакции следят с помощью нингидринового теста (тест Кайзера) до получения отрицательных результатов. По завершении промыть три раза ДМФ для получения Fmoc-Pro-Val-аминорезина.
Шаг 3:Следуя методу, описанному в шаге 2, последовательно соедините каждую аминокислоту в соответствии с последовательностью меланотана I. После завершения реакции сочетания Ac-Ser(tBu)-OH промывайте три раза ДМФ, три раза ДХМ (дихлорметаном) и три раза метанолом. Высушите в вакууме, чтобы получить 23,89 г полностью защищенного меланотана I, связанного со смолой.
III. Получение сырого пептида Меланотан I
23,89 г полностью защищенного пептида, связанного со смолой Меланотан I, помещали в круглодонную колбу. При 0°C при перемешивании медленно добавляли 250 мл предварительно приготовленной смеси для расщепления (состоящей из TFA:тиоанизол:фенол:триизопропилсилан:вода = 82,5:7,5:5:3:2 по объему). Смесь реагировала при низкой температуре в течение 0,5 часов с последующей реакцией при комнатной температуре в течение 2 часов. Раствор для расщепления затем фильтровали под вакуумом. Этот раствор медленно добавляли к 2 л ледяного безводного диэтилового эфира при перемешивании. Неочищенный пептид выделяли фильтрованием, трижды промывали ледяным диэтиловым эфиром и получали 8,55 г неочищенного пептида Меланотана I.
IV. Получение очищенного пептида меланотан I
Шаг 1:Растворите неочищенный пептид Меланотан I в 100 мл очищенной воды и отфильтруйте через мембрану 0,45 мкм, чтобы получить раствор неочищенного пептида.
Шаг 2:Очистите неочищенный пептид Меланотан I с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Используйте колонку динамического осевого сжатия DAC-HB50 с подвижной фазой A (0,05% водный раствор трифторуксусной кислоты) и подвижной фазой B (0,05% трифторуксусная кислота в ацетонитриле). Выполните градиентное элюирование для разделения и очистки. Обнаружьте образец с помощью УФ-детектора и соберите раствор пептида, соответствующий целевому пику, во фракциях.
Шаг 3:После очистки ВЭЖХ получают 180 мл раствора трифторацетата Меланотана I с чистотой, превышающей 99%. Концентрируют раствор до 50 мл с помощью роторного испарения.
Шаг 4:Уравновешивают хроматографическую колонку деионизированной водой и загружают 50 мл очищенного раствора трифторацетата Меланотана I (чистота >99%). Элюируйте в течение 50 минут в системе водного раствора 2% уксусной кислоты. Концентрируют собранный целевой продукт до 80 мл с помощью роторного испарения. Выполните предварительную сушку замораживанием и сушку замораживанием, чтобы в конечном итоге получить 5,33 г очищенного пептида Меланотана I с выходом 32,33%.
Время публикации: 5 января 2026 г.